Magnetski univerzalni komplet genomske DNA

A-1 Niska koncentracija stanica ili virusa u početnom uzorku-Obogatite koncentraciju stanica ili virusa.

A-2 Nedovoljna liza uzoraka-Uzorci nisu temeljito pomiješani s puferom za lizu. Predlaže se temeljito miješanje pulsirajućim vrtloženjem 1-2 puta. - Nedovoljna liza stanica uzrokovana smanjenjem aktivnosti proteinaze K. - Nedovoljna liza stanica ili razgradnja proteina zbog nedovoljnog vremena za toplu kupku. Predlaže se izrezivanje tkiva na male komadiće i produljenje vremena kupanja kako bi se uklonili svi ostaci u lizatu.

A-3 Nedovoljna adsorpcija DNA. —Nije dodan etanol ili niskoprocentni umjesto 100% etanola prije nego što je lizat prebačen u centrifugalnu kolonu.

A-4 pH vrijednost pufera za ispiranje je preniska. -Podesite pH na između 8,0-8,3.

Ostatak etanola u eluentu.

—U eluentu je preostali pufer za ispiranje PW. Etanol se može ukloniti centrifugiranjem centrifugirane kolone 3-5 minuta, a zatim staviti na sobnu temperaturu ili inkubator od 50 for 1-2 minute.

A-1 Uzorak nije svjež. —Izvucite pozitivnu DNK uzorka kao kontrolu kako biste utvrdili je li DNK u uzorku degradirana.

A-2 Neispravna prethodna obrada. - Uzrokovano prekomjernim mljevenjem tekućeg dušika, povratkom vlage ili prevelikom količinom uzorka.

Predtretmani bi se trebali razlikovati za različite uzorke. Za uzorke biljaka, temeljito ih sameljite u tekućem dušiku. Za uzorke životinja homogenirajte ili temeljito sameljite u tekućem dušiku. Za uzorke sa staničnim stijenkama koje je teško razbiti, poput G+ bakterija i kvasca, predlaže se upotreba lizozima, litikaze ili mehaničkih metoda za razbijanje staničnih stijenki.

4992201/4992202 Kit za biljnu genomsku DNA prihvaća metodu temeljenu na stupcu koja zahtijeva kloroform za ekstrakciju. Posebno je pogodan za razne uzorke biljaka, kao i za suhi biljni prah. Hi-DNAsecure Plant Kit također se temelji na stupcu, ali bez potrebe za ekstrakcijom fenola/kloroforma, što ga čini sigurnim i netoksičnim. Pogodan je za biljke s visokim udjelom polisaharida i polifenola. 4992709/4992710 DNAquick Plant System prihvaća metodu na bazi tekućine. Ekstrakcija fenola/kloroforma također nije potrebna. Postupak pročišćavanja je jednostavan i brz, bez ograničenja za početne količine uzorka, pa korisnici mogu fleksibilno prilagoditi količinu prema eksperimentalnim zahtjevima. Velike veličine fragmenata gDNA mogu se dobiti s visokim prinosom.

Genomska DNA je ekstrahirana iz različitih volumena uzoraka ljudske pune krvi pomoću TIANamp Blood DNA Kit. Rezultati su sljedeći. Rezultati su navedeni samo kao referenca, stvarni rezultati ekstrakcije ovise o uvjetima uzoraka.

Ekstrakcija DNK krvnog ugruška može se izvesti korištenjem reagensa iz ova dva kompleta jednostavnom promjenom protokola prema specifičnim uputama za ekstrakciju DNK krvnog ugruška. Softverska kopija protokola ekstrakcije DNK krvnog ugruška može se izdati na zahtjev.

Svježi uzorak suspendirajte s 1 ml PBS -a, normalne fiziološke otopine ili TE pufera. Potpuno homogenizirajte uzorak homogenizatorom i skupite talog na dno epruvete centrifugiranjem. Odložite supernatant i resuspendirajte talog s 200 μl pufera GA. Sljedeće pročišćavanje DNA može se provesti prema uputama.

Za pročišćavanje gDNA u uzorcima plazme, seruma i tjelesnih tekućina preporučuje se TIANamp Micro DNA Kit. Za pročišćavanje gDNA virusa iz uzoraka seruma/plazme preporučuje se TIANamp Virus DNA/RNA Kit. Za pročišćavanje gDNA bakterija iz uzoraka seruma i plazme preporučuje se TIANamp Bacteria DNA Kit (za pozitivne bakterije treba uključiti lizozim). Za uzorke sline preporučuje se Hi-Swab DNA Kit i TIANamp Bacteria DNA Kit.

Za ekstrakciju genoma gljiva preporučuju se DNAsecure Plant Kit ili DNAquick Plant System. Za ekstrakciju genoma kvasca preporučuje se TIANamp komplet DNA kvasca (litikazu treba pripremiti samostalno).