TIANcombi DNA Lyse & Det PCR komplet

Brzo pročišćavanje DNA iz različitih materijala za PCR detekciju.

TIANcombi DNA Lyse & Det PCR komplet prihvaća jedinstveni dizajn pakiranja koji uključuje sve reagense za brzu pripremu genomske DNA i PCR amplifikaciju. Primjenjivo je za jednostupanjsko pročišćavanje DNK genoma iz različitih uzoraka (biljno tkivo, sjeme, životinjsko tkivo, krv, kvasac i bakterije) te za naknadnu PCR amplifikaciju i detekciju. Uklanjanje proteina, RNA i drugih sekundarnih metabolita, ekstrakcija organskog otapala, kao ni koraci taloženja etanola nisu potrebni u cijelom procesu pročišćavanja, što postupak čini jednostavnim i brzim. Kvaliteta proizvoda je stabilna i pouzdana.

2 × Det PCR MasterMix koji dolazi iz ovog kompleta visoko je kompatibilan PCR reagens koji može učinkovito i specifično pojačati DNA bez potrebe za uklanjanjem nečistoća poput proteina. Ovaj reagens sadrži Taq DNA polimerazu, dNTPs, MgCl2, pufer, kao i pojačivač, optimizator i stabilizator za PCR reakciju. Primjena reagensa čini PCR reakciju brzom, jednostavnom, osjetljivom, specifičnom i stabilnom. Stoga je ovaj komplet posebno prikladan za visokopropusne provjere.

Mačka. Ne Veličina pakiranja
4992527 20 µl × 50 rxn
4992528 20 µl × 200 rxn

 

 


Detalji o proizvodu

Eksperimentalni primjer

Pitanja

Oznake proizvoda

Značajke

■ Jednostavno i brzo: DNK iz različitih tkiva može se izvući za 5 minuta bez potrebe za mljevenjem tekućeg dušika.
■ Široka primjena: Primjenjivo za lišće biljaka, sjeme, životinjsko tkivo, uzorke krvi (svježa krv, antikoagulant, krvni ugrušci, osušene mrlje krvi itd.), Kvasac i bakterije.
■ Snažna kompatibilnost: PCR reagens prikladan je za amplifikaciju DNA ekstrahirane iz različitih izvora uzoraka.

Prijave

■ Otkrivanje gena: Idealan izbor za detekciju gena velikih razmjera.

Važne bilješke

■ Za uzorke koji sadrže visoku razinu fenola, poput lišća pamuka, ulazna količina uzorka trebala bi biti strogo manja od 0,4 mg, inače će utjecati na PCR reakciju.

Svi se proizvodi mogu prilagoditi za ODM/OEM. Za detalje,kliknite Prilagođena usluga (ODM/OEM)


  • Prethodno:
  • Sljedeći:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Exampl DNK je ekstrahirana iz 5 mg lišća i sjemena kukuruza, pšenice, riže, soje i pamuka. DNA je amplificirana PCR -om pomoću specifičnih početnica. Umetnuto je 6 μl DNA od ukupno 20 μl eluenta po traci.
    1: Genom pozitivne kontrole; 2: ostavite uzorke; 3: uzorci sjemena; 4: NTC; 5: temeljni premazi D2000
    Experimental Example M: TIANGEN Marker D2000; 1: Pozitivna kontrola;
    2-7: Broj osušenih krvnih mrlja na filter papiru je 1-6; 8: Negativna kontrola.
    Bušač od 3 mm upotrijebljen je za uzimanje osušenih mrlja krvi s filtriranog papira kao materijala za ispitivanje ekstrakcije.
    Nametnuto je 6 μl DNA od ukupno 20 μl eluenta po traci.
    Experimental Exampl M: TIANGEN Marker D2000; 1: Pozitivna kontrola (genomska DNA korištena je kao predložak); 2-7: Količina dodane krvi je 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl, odnosno 60 μl; 8-13: Količina dodane krvi je 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl, odnosno 60 μl; 14: NTC.
    6 μl DNA iz ukupnih 20 μl eluenta naneseno je na agarozni gel.
    P: Nema pojaseva pojačanja

    Predložak A-1

    ■ Predložak sadrži proteinske nečistoće ili inhibitore Taq, itd. - Očistite predložak DNK, uklonite proteinske nečistoće ili ekstrahirajte predložak DNA pomoću setova za pročišćavanje.

    ■ Denaturacija šablone nije dovršena —— Prikladno povećajte temperaturu denaturacije i produljite vrijeme denaturacije.

    ■ Degradacija predloška ——Ponovo pripremite predložak.

    A-2 Primer

    ■ Loša kvaliteta temeljnih premaza-Ponovno sintetizirajte temeljni premaz.

    ■ Razgradnja temeljnog premaza —— Podijelite prajmere velike koncentracije u mali volumen radi očuvanja. Izbjegavajte višestruko zamrzavanje i odmrzavanje ili dugotrajno krio konzerviranje na 4 ° C.

    ■ Nepravilno oblikovanje temeljnih premaza (npr. Duljina temeljnog premaza nije dovoljna, nastaje dimer između temeljnih premaza itd.)

    A-3 mg2+koncentracija

    ■ Mg2+ koncentracija je preniska —— Pravilno povećajte Mg2+ koncentracija: Optimizirajte Mg2+ koncentracija nizom reakcija od 1 mM do 3 mM s intervalom od 0,5 mM za određivanje optimalne Mg2+ koncentracija za svaki predložak i temeljni premaz.

    A-4 Temperatura žarenja

    ■ Visoka temperatura žarenja utječe na vezivanje temeljnog premaza i šablone. ——Smanjite temperaturu žarenja i optimizirajte stanje s gradijentom od 2 ° C.

    A-5 Vrijeme produženja

    ■ Kratko vrijeme produženja —— Produžite vrijeme produženja.

    P: Lažno pozitivno

    Fenomeni: Negativni uzorci također pokazuju trake ciljnog niza.

    A-1 Kontaminacija PCR-om

    ■ Unakrsna kontaminacija ciljane sekvence ili produkata amplifikacije —— Pažljivo ne pipetirajte uzorak koji sadrži ciljnu sekvencu u negativnom uzorku ili ih prosipajte iz epruvete za centrifugiranje. Reagense ili opremu treba autoklavirati radi uklanjanja postojećih nukleinskih kiselina, a postojanje kontaminacije treba utvrditi eksperimentima s negativnom kontrolom.

    ■ Kontaminacija reagensa —— Raspršite reagense i čuvajte na niskoj temperaturi.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ koncentracija je preniska —— Pravilno povećajte Mg2+ koncentracija: Optimizirajte Mg2+ koncentracija nizom reakcija od 1 mM do 3 mM s intervalom od 0,5 mM za određivanje optimalne Mg2+ koncentracija za svaki predložak i temeljni premaz.

    ■ Neispravan dizajn temeljnog premaza, a ciljna sekvenca ima homologiju s neciljanom sekvencom. —— Premazi za ponovno oblikovanje.

    P: Nespecifično pojačanje

    Fenomeni: PCR amplifikacijske trake nisu u skladu s očekivanom veličinom, bilo velike ili male, ili se ponekad pojavljuju i specifične pojačane pojaseve i nespecifične pojačane pojaseve.

    A-1 Primer

    ■ Loša specifičnost temeljnog premaza

    —— Premaz za ponovno oblikovanje.

    ■ Koncentracija temeljnog premaza je previsoka —— Pravilno povećajte temperaturu denaturacije i produljite vrijeme denaturacije.

    A-2 mg2+ koncentracija

    ■ Mg2+ koncentracija je previsoka —— Pravilno smanjite koncentraciju Mg2+: Optimizirajte Mg2+ koncentracija nizom reakcija od 1 mM do 3 mM s intervalom od 0,5 mM za određivanje optimalne Mg2+ koncentracija za svaki predložak i temeljni premaz.

    A-3 Termostabilna polimeraza

    ■ Prekomjerna količina enzima —— Smanjite količinu enzima na odgovarajući način u intervalima od 0,5 U.

    A-4 Temperatura žarenja

    ■ Temperatura žarenja je preniska-prikladno povećajte temperaturu žarenja ili usvojite dvostupanjsku metodu žarenja

    A-5 PCR ciklusi

    ■ Previše ciklusa PCR -a - Smanjite broj ciklusa PCR -a.

    P: Zakrpljene ili razmazane trake

    A-1 Primer—— Loša specifičnost —— Preoblikovati temeljni premaz, promijeniti položaj i dužinu temeljnog premaza kako bi se poboljšala njegova specifičnost; ili izvesti ugniježđeni PCR.

    A-2 Predložak DNK

    —— Predložak nije čist—— Očistite predložak ili ekstrahirajte DNA kompletima za pročišćavanje.

    A-3 mg2+ koncentracija

    ——Mg2+ koncentracija je previsoka —— Pravilno smanjite Mg2+ koncentracija: Optimizirajte Mg2+ koncentracija nizom reakcija od 1 mM do 3 mM s intervalom od 0,5 mM za određivanje optimalne Mg2+ koncentracija za svaki predložak i temeljni premaz.

    A-4 dNTP

    —— Koncentracija dNTP -a je previsoka —— Skladno smanjite koncentraciju dNTP -a

    A-5 Temperatura žarenja

    —— Preniska temperatura žarenja —— Prikladno povećajte temperaturu žarenja

    Ciklusi A-6

    —— Previše ciklusa ——Optimizirajte broj ciklusa

    P: Koliko šablone DNK treba dodati u reakcijski sustav PCR -a od 50 μl?
    ytry
    P: Kako pojačati dugačke fragmente?

    Prvi korak je odabir odgovarajuće polimeraze. Obična Taq polimeraza ne može se lektirati zbog nedostatka 3'-5 'egzonukleazne aktivnosti, a neusklađenost će uvelike smanjiti učinkovitost produženja fragmenata. Stoga obična Taq polimeraza ne može učinkovito pojačati ciljane fragmente veće od 5 kb. Taq polimerazu sa posebnom modifikacijom ili drugu polimerazu visoke vjernosti treba odabrati kako bi se poboljšala učinkovitost produženja i zadovoljile potrebe pojačanja s dugim fragmentima. Osim toga, pojačavanje dugih fragmenata također zahtijeva odgovarajuću prilagodbu dizajna temeljnog premaza, vrijeme denaturacije, vrijeme produženja, pH pufera itd. Obično, temeljni premazi s 18-24 bp mogu dovesti do boljeg prinosa. Kako bi se spriječilo oštećenje šablona, ​​vrijeme denaturacije pri 94 ° C treba smanjiti na 30 sekundi ili manje po ciklusu, a vrijeme za povećanje temperature na 94 ° C prije pojačanja treba biti manje od 1 minute. Štoviše, postavljanje temperature produženja na oko 68 ° C i projektiranje vremena produženja prema brzini od 1 kb/min može osigurati učinkovito pojačanje dugih fragmenata.

    P: Kako poboljšati vjernost amplifikacije PCR -a?

    Stopa pogrešaka amplifikacije PCR -a može se smanjiti upotrebom različitih DNA polimeraza visoke vjernosti. Među svim dosad pronađenim Taq DNA polimerazama, Pfu enzim ima najmanju stopu pogrešaka i najveću vjernost (vidi priloženu tablicu). Osim odabira enzima, istraživači mogu dodatno smanjiti brzinu mutacije PCR -a optimiziranjem reakcijskih uvjeta, uključujući optimiziranje sastava pufera, koncentraciju termostabilne polimeraze i optimiziranje broja ciklusa PCR -a.

    Ovdje napišite svoju poruku i pošaljite nam je